百家乐,百家乐官方网站,百家乐APP下载,百家乐游戏平台,百家乐网址,百家乐试玩,百家乐的玩法,百家乐技巧,百家乐公式,百家乐打法,百家乐电子,21点,德州扑克,快三,pk10,时时彩,北京赛车

　　感谢您对本站的支持，您的赏金将帮助我们更好的发展。本次下载而产生的赏金将由本站以一定方式转交版权人和上传用户。

　　您支付成功后，系统会自动为您创建此邮箱/手机号的账号，密码跟您输入的邮箱/手机号一致，以方便您下次登录下载和查看订单。注：支付完成后需要自己下载文件，并不会自动发送文件哦！

　　3、本站资源下载后的文档和图纸-无水印,预览文档经过压缩，下载后原文更清晰

　　食管癌ESOPHAGEALCARCINOMA，EC是全球第八大恶性肿瘤，死亡率高，5年生存率不到15％。在我国，食管鳞状细胞癌ESOPHAGEALSQUAMOUSCELLCARCINOMA，ESCC是最常见的病理类型，具有易复发和转移等特点。近年来大量研究表明，MIR373在多种恶性肿瘤中均发挥了重要作用。VOORHOEVE等人于2006年第一次提出MIR373,作为一个新的癌基因，它在睾丸精原细胞瘤中通过阻断P53通路来参与肿瘤的进展。它也可以通过作用于靶基因PPP6C调节细胞周期，来促进肝癌细胞的生长。而在乳腺癌中，通过监测循环血中MIR373的表达含量可以了解是否发生淋巴结转移。另外，MIR373通过作用于RAB22A来抑制人卵巢癌的侵袭和转移，从而发挥了抑癌基因的作用。基因芯片技术分析，MIR373在ESCC组织中表达上调，比正常组织至少高15倍。然而，MIR373在ESCC中的作用机制目前尚不清楚，尤其在血浆中的表达水平及意义目前尚无研究。基质金属蛋白酶MATRIXMETALLOPROTEINASE，MMPS是一系列能够降解细胞外基质的蛋白水解酶，通过破坏瘤细胞周围的组织学屏障，促进恶性肿瘤细胞的浸润及转移。MMPS与基质金属蛋白酶抑制剂TISSUEINHIBITOROFMETALLOPROTEINASE，TIMPS在正常人体内环境中处于平衡状态，由于肿瘤的特性，使两者之间的平衡被打破，从而提高了肿瘤侵袭及转移的能力。其中基质金属蛋白酶抑制剂3TISSUEINHIBITOROFMETALLOPROTEINASE3,TIMP3与恶性肿瘤的关系密切，作为一种抑癌基因，TIMP3的低表达可以促进肿瘤的生长、侵袭和转移，还能抑制细胞凋亡。另外，通过检测TIMP3在膀胱癌及ESCC中的表达水平，还可以推测患者的预后。在以往的研究中，发现TIMP3与ESCC的迁移及侵袭能力密切相关，而通过生物信息学软件的预测，我们也发现TIMP3可能为MIR373的靶基因。在本项研究中，我们检测了MIR373在ESCC组织及血浆中的表达水平，并通过细胞转染技术使MIR373的表达上调或下调，观察MIR373对ESCC细胞增殖、凋亡、细胞迁移及侵袭能力的影响。寻找MIR373的直接靶基因，探讨MIR373在ESCC发病过程中的作用机制，为ESCC的诊断及治疗提供了新的理论依据。第一部分MIR373在食管鳞状细胞癌中的表达水平及临床意义目的测定MIR373在ESCC组织及术前血浆中的表达水平，分析MIR373的异常表达与ESCC的分化程度、T分期、淋巴结转移及TNM分期等临床特征的关系，探讨MIR373在组织及血浆中表达水平的相关性。方法从2012年10月到2014年9月在山东省肿瘤医院及泰安市中心医院首次诊断为ESCC患者中选取63名，收集肿瘤组织、瘤旁正常组织及术前外周血，另取39例健康志愿者的外周血作为阴性对照组。采用实时荧光定量PCR技术测定MIR373在ESCC肿瘤组织及瘤旁正常组织中的表达水平，同时检测了MIR373在术前ESCC患者及健康志愿者血浆中的表达水平。结果1MIR373在63例ESCC肿瘤组织中的表达水平要显著高于瘤旁正常组织P＜001。MIR373在组织中的表达水平与分化程度、肿瘤T分期及淋巴结转移密切相关P＜005。2MIR373在63例ESCC术前血浆中的表达水平要显著高于39例健康志愿者P＜001。MIR373在血浆中的表达水平与肿瘤T分期及淋巴结转移密切相关P＜005。3SPEARMAN相关性检验分析得知，MIR373在肿瘤组织中的表达水平与血浆中的表达水平呈正相关R0553,P＜001。说明MIR373在组织及血浆中的表达水平具有一致性。结论MIR373在ESCC组织及外周血浆中的表达均显著升高，表明MIR373作为癌基因在ESCC的发病过程中发挥了重要作用。第二部分MIR373对食管鳞癌细胞株生物学行为的影响目的观察MIR373表达水平的变化对ESCC细胞增殖、凋亡、迁移及侵袭能力等生物学行为的影响，探讨MIR373的表达与ESCC生物学特性的关系。方法实时荧光定量PCR技术检测4种ESCC细胞系中MIR373的表达水平。选取MIR373表达水平最高的KYSE410和表达水平最低的ECA109来进行功能实验。将MIR373MIMICS转染到ECA109细胞中来提高MIR373的表达水平，将MIR373INHIBITOR转染到KYSE410细胞中来降低MIR373的表达水平。通过CCK8实验来评估ESCC细胞的增殖能力，凋亡检测试剂盒测定细胞凋亡的变化，应用未覆盖及覆盖MATRIGEL胶的TRANSWELL小室分别来进行细胞迁移及侵袭实验。结果1MIR373表达水平的次序为KYSE410＞EC9706＞TE1＞ECA109。选取MIR373表达水平最高的KYSE410和表达水平最低的ECA109来进行功能实验。2在ECA109细胞中，转染48H后，MIR373MIMICS组的细胞增殖能力要高于阴性对照组P＜005而转染72H后，两者之间的区别更加明显P＜001。在KYSE410细胞中，转染48H后，MIR373INHIBITOR组的细胞增殖能力低于阴性对照组P＜005转染72H后，两者之间的差异仍具有统计学意义P＜005。这些结果显示，MIR373可以提高ESCC细胞的增殖能力。3MIR373MIMICS组凋亡细胞所占的比例与阴性对照组相比，无显著区别P＞005。而MIR373INHIBITOR组凋亡细胞的比例要高于阴性对照组P＜001。因此，抑制MIR373的表达可以促进ESCC的细胞凋亡。4转染MIR373MIMICS后ECA109的迁移能力及侵袭能力较阴性对照组显著提高P＜001。转染MIR373INHIBITOR后KYSE410的迁移能力及侵袭能力较阴性对照组显著减弱P＜001。说明MIR373可以提高ESCC细胞的迁移及侵袭能力。结论MIR373的过表达可以提高ESCC的细胞增殖、迁移及侵袭能力。抑制MIR373的表达可以减弱ESCC的细胞增殖、迁移及侵袭能力，促进肿瘤细胞的凋亡。第三部分MIR373对食管鳞状细胞癌作用机制的初步研究目的MIRNAS虽然不编码蛋白质，但是可以通过碱基互补配对的方式与MRNA的3UTR区域结合，导致MRNA的降解或抑制其转录后翻译。通过生物信息学软件，我们预测到MIR373存在多个潜在靶基因，结合在ESCC中与侵袭、转移有关的基因，我们选择TIMP3来进行下一步的研究，探索TIMP3是否为MIR373的直接靶基因来影响ESCC细胞的生物学行为。方法检测转染前后ESCC细胞中TIMP3蛋白表达的差异，双荧光素酶实验验证TIMP3是否为MIR373的直接靶基因，同时通过功能实验进一步验证TIMP3是否影响MIR373对ESCC细胞的迁移及侵袭作用。结果1转染MIR373MIMICS后，ECA109细胞中TIMP3蛋白的相对表达量要显著低于阴性对照组。转染MIR373INHIBITOR后，KYSE410细胞中TIMP3蛋白的相对表达量要显著高于阴性对照组。2双荧光素酶实验显示，TIMP33UTRWT与MIR373MIMICS共转染到人HEK293T细胞中，其荧光值比阴性对照组下降37％，而TIMP3WT/NC，TIMP3MUT/NC及TIMP3MUT/MIR373之间没有显著差异。3无3UTR区域的PCDNA31TIMP3和MIR373MIMICS共转染到ECA109细胞中。PCDNA31TIMP3能够减弱MIR373MIMICS对ECA109迁移及侵袭能力的促进作用。SHRNATIMP3与MIR373INHIBITOR共转染到KYSE410细胞中，SHRNATIMP3可以减弱MIR373INHIBITOR对KYSE410迁移及侵袭能力的抑制作用。结论在ESCC中，TIMP3为MIR373的直接靶基因，MIR373通过抑制TIMP3的表达来提高肿瘤的迁移及侵袭能力。

　　本文（mir-373在食管鳞状细胞癌中的功能及作用机制研究.pdf）为本站会员（沈浪沧海）主动上传，众赏文库仅提供信息存储空间，仅对用户上传内容的表现方式做保护处理，对上载内容本身不做任何修改或编辑。 若此文所含内容侵犯了您的版权或隐私，请立即通知众赏文库（发送邮件至或直接QQ联系客服），我们立即给予删除！